p300/CBP相关因子对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究

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【作者】邱立强夏豪江洪徐昌武

【关键词】 p300-CBP转录因子; 肌细胞平滑肌; 细胞运动; 绿色荧光蛋白质类; NF-κB;

【摘要】目的探讨p300/CBP相关因子（PCAF）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取大鼠原代VSMC,使用Ad-PCAF RNAi腺病毒转染VSMC以下调PCAF表达。选择1μg/ml的脂多糖作为VSMC迁移诱导剂。将实验分为4组:不添加脂多糖（对照组）、1μg/ml脂多糖刺激（A组）、Ad-绿色荧光蛋白（GFP）腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激（B组）、Ad-PCAF RNAi腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激（C组）。采用Transwell实验检测细胞迁移水平。免疫荧光染色实验检测VSMC中NF-κB p65的核转位情况。Western blot检测PCAF、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,A组和B组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与B组比较,C组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组比较,A组和B组穿出小室细胞数明显增多,差异有统计学意义[（766.30±40.86）个/视野、（794.00±76.36）个/视野vs （202.70±22.59）个/视野,P<0.05];与B组比较,C组穿出小室细胞数明显减少,差异有统计学意义[（337.00±82.95）个/视野vs （794.00±76.36）个/视野,P<0.05]。免疫荧光染色实验结果显示,与对照组比较,A组和B组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与B组比较,C组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论下调PCAF的表达可明显抑制VSMC迁移,其机制可能与下调PCAF后抑制NF-κB信号通路介导的炎性反应有关。

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